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體內(nèi)處理精原干細(xì)胞產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因小鼠的試驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)原理轉(zhuǎn)基因小鼠的產(chǎn)生促使我們理解成長(zhǎng)和發(fā)展的各個(gè)方面了有了巨大的進(jìn)步。使用各種技術(shù)將一個(gè)單細(xì)胞胚胎植入到偽孕媽媽或用干細(xì)胞植入技術(shù)生成淘汰或基因敲除小鼠。這些實(shí)驗(yàn)昂貴，勞動(dòng)密集，費(fèi)時(shí)和需要好幾個(gè)女的捐助者。精原干細(xì)胞是負(fù)責(zé)生產(chǎn)精子和合適的生殖轉(zhuǎn)換對(duì)象。Nagano等將重組逆轉(zhuǎn)錄病毒體外感染精原干細(xì)胞，然后異種移植到雄性小鼠睪丸細(xì)胞后產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因小鼠產(chǎn)生。在某些情況下受體小鼠很難接受供體的精原細(xì)胞，其成功率是相當(dāng)?shù)偷摹Ｍ瑯?，攜帶lacZ基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒與睪丸生殖細(xì)胞的體內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)...

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胚胎干細(xì)胞表觀遺傳全景圖

人類胚胎干細(xì)胞（hESCs）分化過程是研究細(xì)胞轉(zhuǎn)換調(diào)控機(jī)制的一個(gè)*的模型，因此近年來以胚胎干細(xì)胞為模型，研究有關(guān)干細(xì)胞分化的表觀遺傳調(diào)控已成為新的研究熱點(diǎn)。研究人員利用全基因組重亞硫酸鹽測(cè)序技術(shù)，并結(jié)合染色質(zhì)免疫沉淀測(cè)序方法，以及RNA測(cè)序方法，揭示了與每個(gè)胚層細(xì)胞系特異性有關(guān)的中的特殊事件。在假設(shè)遠(yuǎn)端調(diào)控元件中出現(xiàn)了一些顯而易見的DNA甲基化和H3K4me1譜系特異性變化，而這些元件均頻繁的與未分化人類胚胎干細(xì)胞中多能性因子結(jié)合在一起。而且研究人員也在未分化狀態(tài)的高DNA甲...

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全功能人造復(fù)眼研制成功

蒼蠅不易被打死很大程度上得益于它的復(fù)眼，因?yàn)閺?fù)眼視野廣闊，視覺敏銳，因而復(fù)眼一直是仿生學(xué)的重要研究對(duì)象之一。歐洲研究人員日前宣布，他們已成功研制出全功能微型人造復(fù)眼，實(shí)用前景廣闊。歐盟委員會(huì)8月14日發(fā)布的消息說，來自瑞士、法國(guó)和德國(guó)的研究人員共同完成了這個(gè)項(xiàng)目，這一人造復(fù)眼模擬了果蠅的復(fù)眼，但體積更大，直徑12.8毫米，重1.75克，由630個(gè)單眼組成，每個(gè)單眼又由一個(gè)透鏡和一個(gè)電子感應(yīng)器組成，左右視野達(dá)180度，上下視野達(dá)60度。據(jù)介紹，人造復(fù)眼具廣泛用途：把人造復(fù)眼安裝...

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成功將老鼠皮膚細(xì)胞轉(zhuǎn)化為大腦神經(jīng)細(xì)胞

美國(guó)凱斯西儲(chǔ)大學(xué)醫(yī)學(xué)院的科學(xué)家表示，他們研發(fā)出一種新技術(shù)，直接將老鼠的皮膚細(xì)胞變?yōu)楣δ苄缘哪X細(xì)胞，接下來，他們打算使用人體細(xì)胞進(jìn)行測(cè)試，如果成功，將成為治療多發(fā)性硬化病患、腦癱病患和其他髓磷脂失調(diào)病患的有效手段。新技術(shù)將出現(xiàn)在皮膚和大多數(shù)器官內(nèi)的纖維細(xì)胞直接變?yōu)樯偻荒z質(zhì)細(xì)胞，進(jìn)而產(chǎn)生髓磷脂——一類負(fù)責(zé)讓大腦內(nèi)的神經(jīng)元形成髓鞘的細(xì)胞，使髓鞘細(xì)胞可以“隨點(diǎn)隨有”。髓鞘細(xì)胞為大腦神經(jīng)元提供了一個(gè)重要的隔絕膜，保護(hù)神經(jīng)元并使大腦脈沖傳遞到全身。在多發(fā)性硬化病患、腦癱病患和罕見的腦白質(zhì)...

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新型ELISA可肉眼判讀

研究人員開發(fā)了新型ELISA酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)，當(dāng)抗體識(shí)別目標(biāo)分子時(shí)這種酶就會(huì)生成有色物質(zhì)，讓人們可以直接用肉眼讀取檢測(cè)結(jié)果。要檢測(cè)超低水平的蛋白，需用到的儀器并不便宜，也不是人人都承擔(dān)的起。本期Nature雜志就推薦了一項(xiàng)亮點(diǎn)研究，英國(guó)倫敦帝國(guó)理工學(xué)院的MollyStevens和RobertodelaRica發(fā)明了新型ELISA技術(shù)，僅用肉眼即可讀取檢測(cè)結(jié)果，他們這項(xiàng)研究發(fā)表在Nature子刊NatureNanotechnology雜志上。在他們的方法中，ELISA中的酶用來...

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血漿中C的ELISA測(cè)定

實(shí)驗(yàn)原理將抗C單克隆抗體包被固相聚苯乙烯板，加入經(jīng)聚乙二醇（PEG）處理的待測(cè)樣本，然后依次加入兔抗人C-IgC多克隆抗體和過氧化物酶標(biāo)記的豬抗兔IsC，再加入底物2，2’-連氮-雙（3-乙基苯駢唑啉-6-磺酸鹽）（ABTS）和H2O2顯色，于酶標(biāo)儀405mn處測(cè)定每分鐘光密度增加量（OD/min），以O(shè)D/min為縱坐標(biāo)，C標(biāo)準(zhǔn)晶濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，求出待測(cè)樣本中C的含量。實(shí)驗(yàn)試劑1.PBSPH7.2，9mmol/L磷酸鹽緩沖液含140mmol/LNaCl。2.PB...

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控制血管再生可抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)

研究人員發(fā)現(xiàn)，在一種特殊腫瘤的基因變異中，血管再生方式發(fā)生改變，調(diào)控血管再生的主開關(guān)被打開，為癌細(xì)胞建造運(yùn)輸營(yíng)養(yǎng)的血管通道。而瞄準(zhǔn)這一主開關(guān)就可能預(yù)防或阻止癌細(xì)胞再造血管，切斷其營(yíng)養(yǎng)供給途徑。癌細(xì)胞能控制組織產(chǎn)生新血管，為其運(yùn)輸氧氣和所需要的糖，所以長(zhǎng)得比正常細(xì)胞更快。研究小組負(fù)責(zé)人邁克爾?雷多莫里解釋說，控制血管再生對(duì)控制腫瘤生長(zhǎng)非常關(guān)鍵。血管再生是兩種同型的血管再生因子VEGF165（促血管再生因子）和VEGF165b（抗血管再生因子）之間的平衡，制造這兩種蛋白要把不同的...

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成纖維細(xì)胞的分離技術(shù)

實(shí)驗(yàn)步驟選擇大約一半足孕時(shí)間的胚胎好，10-13天齡胚胎含有大數(shù)量的未分化的間質(zhì)細(xì)胞，成纖維細(xì)胞可從這些細(xì)胞衍生獲得。1.胚胎的分離1）適用哺乳動(dòng)物（倉(cāng)鼠、小鼠和大鼠）a.采用認(rèn)可的方案處死嚙齒動(dòng)物b.立即在無菌超凈臺(tái)內(nèi)用70%乙醇擦洗整個(gè)動(dòng)物。若可能，置紫外燈下照射5min。c.用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后退。d.用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，去除含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上e.剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS...

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