25格×16格的血球計數(shù)板使用方法介紹

血球計數(shù)板介紹用厚玻璃制成。每塊計數(shù)板由H形凹槽分為2個同樣的計數(shù)池。計數(shù)池兩側(cè)各有一支持柱，將特制的蓋玻片覆蓋其上，形成高0.10mm的計數(shù)池。計數(shù)池畫有長、寬各3.0mm的方格，分為9個大方格，每個大格面積為1.0mm。容積為0.1mm3（ul），其中，中央大方格用雙線分成25個中方格，位于正中及四角5個中方格是紅細(xì)胞計數(shù)區(qū)域，用單線劃分為16個小方格。

四角的4個大方格是白細(xì)胞計數(shù)區(qū)域，用單線劃分為16個中方格。根椐標(biāo)準(zhǔn)局（NBS）規(guī)定，大方格每邊長度允許誤差為±1%。

使用方法：

1.視待測菌懸液濃度，加無菌水適當(dāng)稀釋（斜面一般稀釋100倍），以每小格的菌數(shù)可數(shù)為度。

2.取潔凈的血球計數(shù)板一塊，在計數(shù)區(qū)上蓋上一塊蓋玻片。

3.將菌懸液搖勻，用滴管吸取少許，從計數(shù)板中間平臺兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴（不宜過多），讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計數(shù)區(qū)，勿使氣泡產(chǎn)生，并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計數(shù)區(qū)上（不要使計數(shù)區(qū)兩邊平臺沾上菌懸液，以免加蓋蓋玻片后，造成計數(shù)區(qū)深度的升高），然后加蓋蓋玻片（勿使產(chǎn)生氣泡）。

4.靜置片刻，使細(xì)胞沉降到計數(shù)板上，不再隨液體漂移。將血球計數(shù)板放置于顯微鏡的載物臺上夾穩(wěn)，先在低倍鏡下找到計數(shù)區(qū)后，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計數(shù)。由于細(xì)胞的折光率和水的折光率相近，觀察時應(yīng)減弱光照的強(qiáng)度。

5.25個大方格組成的計數(shù)區(qū)，除數(shù)上述四個大方格外，還需數(shù)中央1個大方格的菌數(shù)（即80個小格）。為了保證計數(shù)的準(zhǔn)確性，避免重復(fù)計數(shù)和漏記，在計數(shù)時，對沉降在格線上的細(xì)胞的統(tǒng)計應(yīng)有統(tǒng)一的規(guī)定。如菌體位于大方格的雙線上，計數(shù)時則數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線，以減少誤差。即位于本格上線和左線上的細(xì)胞計入本格，本格的下線和右線上的細(xì)胞按規(guī)定計入相應(yīng)的格中。

6.對于出芽的酵母菌，芽體達(dá)到母細(xì)胞大小一半時，即可作為兩個菌體計算。每個樣品重復(fù)計數(shù)2-3次（每次數(shù)值不應(yīng)相差過大，否則應(yīng)重新操作），按公式計算出每mL（g）菌懸液所含細(xì)胞數(shù)量。

7.測數(shù)完畢，取下蓋玻片，用水將血球計數(shù)板沖洗干凈，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干，放入盒內(nèi)保存。

25格×16格的血球計數(shù)板計算公式：

細(xì)胞數(shù)/ml=80小格內(nèi)細(xì)胞個數(shù)/80×400×10000×稀釋倍數(shù)