本篇文章詳細(xì)介紹了單層貼壁細(xì)胞總蛋白的提取方法和步驟，僅供參考。另外索萊寶公司提供細(xì)胞總蛋白提取試劑盒，更加方便老師和同學(xué)順利完成單層貼壁細(xì)胞總蛋白的提取實驗。

    1. 倒掉培養(yǎng)液，并將瓶倒扣在吸水紙上使吸水紙吸干培養(yǎng)液（或?qū)⑵恐绷⒎胖靡粫菏箽堄嗯囵B(yǎng)液流到瓶底然后再用移液器將其吸走）。

    2. 每瓶細(xì)胞加 3ml 4 ℃預(yù)冷的 PBS （ 0.01M pH7.2 ～ 7.3 ）。平放輕輕搖動 1min 洗滌細(xì)胞，然后棄去洗液。重復(fù)以上操作兩次，共洗細(xì)胞三次以洗去培養(yǎng)液。將 PBS 棄凈 后把培養(yǎng)瓶置于冰上。

    3. 配制裂解試劑，現(xiàn)用現(xiàn) 配制 按 1ml RIPA + 25 μ l PMSF （ 100mM ） +110 μ l Pi （ PhosSTOP 磷酸酶抑制劑），搖勻置于冰上。（ PMSF 要搖勻至無結(jié)晶時才可與裂解液混合。）

    4. 每瓶細(xì)胞加 100 μ l 的裂解液，用干凈的刮棒將細(xì)胞刮于培養(yǎng)瓶的一側(cè)（動作要快），于冰上裂解 30min ，為使細(xì)胞充分裂解培養(yǎng)瓶要經(jīng)常來回?fù)u動。

    5. 裂解完后，然后用槍將細(xì)胞碎片和裂解液移至 1.5ml 離心管中。（整個操作盡量在冰上進行）

    6. 于 4 ℃下 12000rpm 離心 15min 。（提前開離心機預(yù)冷）

    7. 將離心后的上清分裝轉(zhuǎn)移倒 0.6ml 的離心管中放于 -80 ℃保存。