氧化型谷*甘肽含量檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC1185
規(guī)格：100T/96S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：有毒易揮發(fā)試劑，涉及該試劑的步驟建議在通風櫥內操作。

2. 試劑五：臨用前加入2.5 mL蒸餾水，溶解后-20℃分裝可保存4周，避免反復凍融。

3. 試劑六工作液：先將試劑六內液體離心至底部再用移液槍吹打混勻使用。臨用前根據(jù)樣本數(shù)量按照試劑六：蒸餾水=1μL：20μL（21μL，約10T）的比例配制備用，現(xiàn)用現(xiàn)配。

4. 標準品：10mg氧化型谷*甘肽。臨用前加入1 mL蒸餾水，充分溶解，濃度為10 mg/mL，2-8℃可保存4周。

產品說明：
氧化型谷*甘肽（*）是谷*甘肽（GSH）的氧化形式，又稱為二硫代谷*甘肽，是兩分子的谷*甘肽氧化而成。*會被谷*甘肽還原酶還原成GSH，因此機體中大多數(shù)是以還原型形式存在。測定細胞內GSH和*含量以及GSH/*比值，能夠很好地反映細胞所處的氧化還原狀態(tài)。本試劑盒利用谷*甘肽能和5,5’-二硫代-雙-（2-硝*甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反應產生2-硝基-5-*甲酸，2-硝基-5-*甲酸在波長412nm處具有最大光吸收的特點，通過2-乙烯吡啶抑制樣本中原有的還原型谷*甘肽，然后利用谷*甘肽還原酶將*還原為GSH，借此測定氧化型谷*甘肽的含量。

技術指標：
低檢出限：3.211 μg/mL
線性范圍：3.9-125 μg/mL
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、分析天平、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、勻漿器/研缽/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件

注意事項：

1. 若不確定樣本中*含量的高低，可稀釋幾個梯度后再進行測量。

2. 如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進行測定。

3. 因為試劑一中含有蛋白質沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測定。如需測定蛋白含量，需另取組織。

實驗實例：

1. 取0.1064g大鼠肝臟加入1mL試劑一進行冰浴勻漿，按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA測定= A2測定-A1測定=0.240-0.149=0.091，ΔA空白=A2空白-A1空白=0.118-0.114=0.004，ΔA測定-ΔA空白=0.087，根據(jù)標準曲y=0.0117x - 0.0122， R²=0.9989，x=8.479，按樣本質量計算得：

*含量（μg/g 質量）=x÷W =79.690 μg/g 質量。

1. 取0.1050g韭菜葉片加入1mL試劑一進行冰浴勻漿，按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA測定= A2測定-A1測定=0.198-0.150=0.048，ΔA空白=A2空白-A1空白=0.118-0.114=0.004，ΔA測定-ΔA空白=0.044，根據(jù)標準曲線y=0.0117x - 0.0122，R²=0.9989，x=4.803，按樣本質量計算得：

*含量（μg/g 質量）=x÷W =45.74 μg/g 質量。
相關發(fā)表文獻：
[1] Ming Song,Fangfang Chen,Yihui Li,et al. rimetazidine restores the positive adaptation to exercise training by mitigating statin-induced skeletal muscle injury. Journal of Cachexia, Sarcopenia and Muscle. November 2017;(IF10.754)
[2] Hua Li,Lanying Wang,Yanping Luo. Composition Analysis by UPLC-PDA-ESI (?)-HRMS and Antioxidant Activity Using Saccharomyces cerevisiae Model of Herbal Teas and Green Teas from Hainan. Molecules. October 2018;(IF3.06)
參考文獻：

1. Alpert A J, Gilbert H F. Detection of oxidized and reduced glutathione with a recycling postcolumn reaction[J]. Analytical biochemistry, 1985, 144(2): 553-562.

2. Owens C W I, Belcher R V. A colorimetric micro-method for the determination of glutathione[J]. Biochemical Journal, 1965, 94(3): 705.

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