北京索萊寶科技有限公司
專注于生物學(xué)試劑及試劑盒領(lǐng)域
服務(wù)熱線：18101056239
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產(chǎn)品型號(hào)：BC4070-50T/24S
更新時(shí)間：2024-04-12
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：961
010-50973130
產(chǎn)品分類
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紫外分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號(hào)：BC4070
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 提取液 | 液體75 mL×2瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑一 | 粉劑×2支 | 2-8℃保存 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
試劑一：臨用前取1支加入1.5 mL無水乙醇混勻溶解，用不完的試劑可以2-8℃保存一周；
標(biāo)準(zhǔn)品：5 mg沒食子酸丙酯。臨用前加入1.178 mL無水乙醇充分混勻溶解，配成20 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，2-8℃保存兩周。
產(chǎn)品說明：
單寧酶全稱是單寧酯酰水解酶(Tannase，EC 3.1.1.20)，存在于富含單寧的植物，也廣泛存在于微生物中，可以水解酯鍵和縮酚羧鍵，生成沒食子酸和葡萄糖。
使用沒食子酸丙酯（PG）作為單寧酶酶促反應(yīng)的底物，其在270nn下有特征吸收峰，根據(jù)其反應(yīng)前后吸光度的變化來計(jì)算單寧酶活力。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、1mL石英比色皿、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、超聲破碎儀、研缽/勻漿器、乙醇、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1、組織：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液，冰浴勻漿。10000rpm，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、細(xì)胞或細(xì)菌樣本的制備：先收集細(xì)胞或細(xì)菌樣本到離心管內(nèi)，棄上清，按照每500萬細(xì)胞或細(xì)菌加入1mL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）。10000rpm，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
二、測定步驟
紫外分光光度計(jì)預(yù)熱30min，波長調(diào)至270nm，蒸餾水調(diào)零。
標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋：取10μL 20μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入3990μL提取液，充分混勻，配制成0.05μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液使用，現(xiàn)用現(xiàn)配。（實(shí)驗(yàn)中每管需要1000μL，為減小實(shí)驗(yàn)誤差，故配制大體積。）
對(duì)照管樣本處理：吸取0.1mL樣本于1.5mLEP管中作為對(duì)照管，沸水浴5min，冷卻至常溫待測。
加樣表（在1.5mLEP管中分別加入）
| 試劑名稱（μL） | 測定管 | 對(duì)照管 |
| 提取液 | 850 | 850 |
| 試劑一 | 50 | 50 |
| 樣本 | 100 | 100（已滅活） |
| 混勻，置于40℃水浴鍋中準(zhǔn)確反應(yīng)10min，立即沸水浴5min，冰浴冷卻至常溫。10000rpm，室溫離心10min，取上清液待測。 | ||
| 上清液 | 50 | 50 |
| 提取液 | 950 | 950 |
| 充分混勻后測定270nm下的吸光度，分別記為A測定、A對(duì)照，計(jì)算ΔA測定=A對(duì)照-A測定。另取1000μL標(biāo)準(zhǔn)液于石英比色皿中，測定270nm處的吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)。每個(gè)測定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。標(biāo)準(zhǔn)管只需測1-2次。 | ||
注意事項(xiàng)：
如果A測定大于1.5，可以適當(dāng)加大稀釋倍數(shù)，保證總體積1mL不變，如20μL上清液和980μL提取液（相當(dāng)于F=1000/20=50），計(jì)算公式中需改變F和V上清液的數(shù)值。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
取0.1g玉蘭葉加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清后按照測定步驟操作，測得計(jì)算ΔA測定=A對(duì)照-A測定=1.126-1.033=0.093，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：單寧酶（U/g質(zhì)量）=1000×ΔA÷A標(biāo)準(zhǔn)÷W=1000×0.093÷0.609÷0.1=1527.09 U/g 質(zhì)量。
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