維生素B1（VB1）含量檢測(cè)試劑盒說明書
微量法
貨號(hào): BC4195
規(guī)格: 100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：
1、提取液：內(nèi)含不溶物，使用前搖勻；
2、標(biāo)準(zhǔn)品：10mg維生素B1。臨用前加入1mL稀釋液，配成10mg/mL（即10000µg/mL）的標(biāo)準(zhǔn)液。
產(chǎn)品說明：
維生素B1（Vitamin B1）又稱硫胺素，以輔酶形式參與糖的分解代謝，在生物體能量代謝中有重要的作用。

VB1在堿性條件下還原鐵*生成亞鐵*，亞鐵*與Fe³⁺在弱酸條件下生成普魯士藍(lán)，測(cè)定布魯士藍(lán)在704nm下的特征吸收峰，即可反映VB1的含量。

技術(shù)指標(biāo)：
低檢出限：0.057 µg/mL
線性范圍：1.953-250 µg/mL
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、EP管、冰和蒸餾水。
操作步驟：

• 樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

1、組織：將樣本磨碎，按照質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入0.6mL提取液）加入提取液，60℃浸提30min，加蒸餾水0.4mL，混勻后于25℃，13000g離心10min，取上清測(cè)定（動(dòng)物組織、豆類種子等蛋白含量較高的樣本建議離心20-30分鐘或反復(fù)離心2-3次至上清無渾濁）。
2、細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入0.6mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；加蒸餾水0.4mL，混勻后于25℃，13000g離心10min，取上清測(cè)定。
3、液體：直接檢測(cè)。
二、測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至704nm，分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

2. 將10mg/mL（10000µg/mL）標(biāo)準(zhǔn)液用稀釋液稀釋為250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表

實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需25µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1. 操作表（在1.5mL EP管中進(jìn)行下列操作）：

三、維生素B1含量計(jì)算
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
以各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸，其對(duì)應(yīng)的ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b，將ΔA帶入方程得x（μg/mL）。
2、維生素B1含量的計(jì)算：
（1）按蛋白濃度計(jì)算：VB1（μg/mg prot）=x×V樣總÷（Cpr×V樣總）= x÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算：VB1（μg/g 質(zhì)量）=x×V樣總÷W = x÷W
（3）按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：VB1（μg/10⁴ cell）= x×V樣總÷細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）= x÷細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）
（4）按液體體積計(jì)算：VB1（μg/mL）= x
V樣總：樣本總體積，1mL； Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。

注意事項(xiàng)：

1. 如果測(cè)定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測(cè)定。

2. 蛋白濃度較高的樣本，比如動(dòng)物組織，豆類種子等建議將樣本稀釋20倍或40倍后再測(cè)定并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

3. 顯色完成后立即進(jìn)行測(cè)定，若顯色完成后有沉淀產(chǎn)生，將其搖勻后測(cè)定。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 稱取0.1g肝臟，加入0.6mL提取液，60℃浸提30min，加蒸餾水0.4mL，混勻后于25℃，13000rpm離心10min，取上清，將上清稀釋40倍之后按照測(cè)定步驟操作，使用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA= A測(cè)定管-A空白管=0.551-0.107=0.444，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0054x+0.0043，計(jì)算x=81.43μg/mL，按樣本質(zhì)量計(jì)算VB1含量得：

VB1（μg/g質(zhì)量）= x×V樣總÷W×40（稀釋倍數(shù)）=81.43×1÷0.1×40=32572 μg/g 質(zhì)量。

1. 稱取0.1g稗草，加入0.6mL提取液，60℃浸提30min，加蒸餾水0.4mL，混勻后于25℃，13000rpm離心10min，取上清，將上清稀釋40倍之后按照測(cè)定步驟操作，使用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA= A測(cè)定管-A空白管=0.727-0.107=0.62，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0054x+0.0043，計(jì)算x =114.02 μg/mL，按樣本質(zhì)量計(jì)算VB1含量得：

VB1（μg/g質(zhì)量）= x×V樣總÷W×40（稀釋倍數(shù)）=114.02×1÷0.1×40=45608 μg/g 質(zhì)量。
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BC1420/BC1425 維生素E（VE）含量檢測(cè)試劑盒

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