亞鐵氧化酶（HP）活性檢測(cè)試劑盒抗氧化

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

儲(chǔ)存條件
2-8℃
中文名稱
亞鐵氧化酶（HP）活性檢測(cè)試劑盒抗氧化
有效期
6個(gè)月
單位
盒
英文名稱
Hephaestin(HP) Activity Assay Kit
檢測(cè)方法
可見(jiàn)分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/24S

產(chǎn)品型號(hào)：BC4340-50T/24S

更新時(shí)間：2024-04-16

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問(wèn) 量：1183

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測(cè)試劑盒-常量法

谷胱甘肽過(guò)氧化物酶4（GPX4）活性檢測(cè) 總谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測(cè) α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測(cè) 硫代葡萄糖苷含量檢測(cè) 生物堿含量檢測(cè) 總氧化狀態(tài)（TOS）檢測(cè) α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測(cè) 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測(cè) 水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測(cè) 植物銨態(tài)氮含量檢測(cè)試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測(cè)試劑盒細(xì)胞酸性磷酸酶細(xì)胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測(cè)定系列其它系列信號(hào)系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

亞鐵氧化酶（HP）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

可見(jiàn)分光光度法

貨號(hào)：BC4340

規(guī)格：50T/24S

產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
試劑一	液體20 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	液體3 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑三	粉劑×1瓶	2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品	液體1 mL×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

1、試劑三：臨用前加入7 mL蒸餾水溶解備用，用不完的試劑2-8℃保存4周。

2、標(biāo)準(zhǔn)品：9 µmol/mL的亞鐵離子標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說(shuō)明：

亞鐵氧化酶（Hsphasetin，HP）是銅藍(lán)蛋白的同系物，催化亞鐵離子（Fe²⁺）氧化為三價(jià)鐵離子（Fe³⁺），從而三價(jià)鐵與轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合，參與細(xì)胞鐵釋放。

以一定濃度的Fe²⁺為底物，在亞鐵氧化酶的催化作用下Fe²⁺被氧化為Fe³⁺，Fe²⁺與菲咯嗪形成有色復(fù)合物，在562 nm處有特征吸收峰，先計(jì)算出未被氧化的Fe²⁺的含量，進(jìn)而得出被氧化的Fe²⁺的含量，可通過(guò)Fe²⁺被氧化的速率來(lái)反映亞鐵氧化酶活性。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、EP管。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

1、組織：按照質(zhì)量（g）︰蒸餾水體積(mL)為1︰5~10的比例（建議稱取約0.1 g，加入1 mL蒸餾水）加入蒸餾水，冰浴勻漿后于10000 rpm，4℃離心10 min，取上清置于冰上待測(cè)。

2、血清或血漿：建議用蒸餾水將血清或血漿稀釋2~4倍后直接檢測(cè)。若溶液渾濁則離心取上清置于冰上待測(cè)。

二、測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至562 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋：將9 µmol/mL的亞鐵離子標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水倍比稀釋為360、180、90、45、22.5、11.25、5.625 nmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

3、標(biāo)準(zhǔn)液稀釋可參考下表：

序號(hào)	稀釋前濃度（nmol/mL）	標(biāo)準(zhǔn)液體積（µL）	蒸餾水體積（µL）	稀釋后濃度（nmol/mL）
1	9000	40	960	360
2	360	500	500	180
3	180	500	500	90
4	90	500	500	45
5	45	500	500	22.5
6	22.5	500	500	11.25
7	11.25	500	500	5.625

備注：實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需100µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

4、操作表：在1.5 mL離心管中依次加入下列試劑：

試劑名稱	對(duì)照管	測(cè)定管	無(wú)基質(zhì)管	空白管	標(biāo)準(zhǔn)管
蒸餾水（µL）	-	-	20	20	20
樣本（µL）	20	20	-	-	-
試劑一（µL）	280	280	280	280	280
用移液槍充分吹打混勻
試劑二（µL）	-	100	100	-	-
標(biāo)準(zhǔn)溶液（µL）	-	-	-	-	100
蒸餾水（µL）	100	-	-	100	-
混勻，37℃水浴鍋或恒溫培養(yǎng)箱中準(zhǔn)確反應(yīng)3 min
試劑三（µL）	100	100	100	100	100
蒸餾水（µL）	500	500	500	500	500
混勻，于1 mL玻璃比色皿測(cè)定562 nm處吸光值A，分別記為A對(duì)照管、A測(cè)定管、A無(wú)基質(zhì)、A空白管和A標(biāo)準(zhǔn)管。計(jì)算ΔA測(cè)定=（A無(wú)基質(zhì)管-A空白管）-（A測(cè)定管-A對(duì)照管），ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管，同一批次無(wú)基質(zhì)管、空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)1-2次。

三、亞鐵氧化酶活性計(jì)算

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

以各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度（nmol/mL）為x軸，其對(duì)應(yīng)的ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程y= kx+b，將ΔA測(cè)定帶入方程得到樣本濃度（x，nmol/mL）。

2、亞鐵氧化酶活性的計(jì)算：

（1）按照樣本蛋白濃度計(jì)算

酶活定義：每mg蛋白每分鐘氧化1 nmol的Fe²⁺定義為1個(gè)酶活力單位。

亞鐵氧化酶酶活（U/mg prot）= x×V試劑二÷（V樣×Cpr）÷T ×N= 1.667x÷Cpr×N

（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活定義：每g樣品每分鐘氧化1 nmol的Fe²⁺定義為1個(gè)酶活力單位。

亞鐵氧化酶酶活（U/g質(zhì)量）= x×V試劑二÷（V樣×W÷V提?。?/span>÷T×N = 1.667x÷W×N

（3）按液體體積計(jì)算

酶活定義：每mL樣本每分鐘氧化1 nmol的Fe²⁺定義為1個(gè)酶活力單位。

亞鐵氧化酶酶活（U/mL）= x×V試劑二÷V樣÷T ×N= 1.667x×N

V試劑二：加入的試劑二體積，0.1 mL；V樣：加入的樣本體積，0.02 mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL，蛋白濃度自行測(cè)定；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間：3 min；N：稀釋倍數(shù)。

注意事項(xiàng)：

1、當(dāng)A測(cè)定低于0.1時(shí)，建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1、取0.1g脾臟，進(jìn)行樣本處理，按照測(cè)定操作步驟，測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=（A無(wú)基質(zhì)管-A空白管）-（A測(cè)定管-A對(duì)照管）=（0.976-0.005）-（0.996-0.047）=0.022，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y = 0.0027x + 0.0036，計(jì)算x=6.815，按照樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

亞鐵氧化酶酶活（U/g質(zhì)量）= 1.667×x÷W×N= 1.667×6.815÷0.1=113.603 U/g質(zhì)量。

2、取兔血清，按照測(cè)定操作步驟，測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=（A無(wú)基質(zhì)管-A空白管）-（A測(cè)定管-A對(duì)照管）=（0.976-0.005）-（0.469-0.009）=0.511，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y = 0.0027x + 0.0036，計(jì)算x=187.926，按照液體體積計(jì)算酶活得：