儲存條件
2-8℃
中文名稱
糖化酶活性檢測試劑盒淀粉系列
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
Glucoamylase Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/24S

產(chǎn)品型號：BC2670-50T/24S

更新時間：2024-07-09

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：1391

服務(wù)熱線

010-50973130

立即咨詢

產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細胞酸性磷酸酶細胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

查看全部產(chǎn)品

相關(guān)文章

GUS染色液的染色原理

瓊脂糖的性能一起來了解下吧！

超氧化物歧化酶(SOD)分型活性檢測試劑盒(測Cu-Zn、Mn、總)的介紹

PCR定量試劑盒靈敏度的驗證方法概述

花生乙酰輔酶A羧化酶合成酶（ACC）ELISA試劑盒使用說明書

產(chǎn)品介紹

糖化酶活性檢測試劑
盒說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC2670
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體110 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	粉劑×2瓶	2-8℃保存
試劑二	液體35 mL×1瓶	2-8℃保存
標準品	粉劑×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

試劑一：臨用前取1瓶加入20 mL提取液，充分混勻后沸水浴直至溶解（約10min），2-8℃保存4周；
標準品：10 mg無水*萄糖。臨用前加1 mL提取液溶解為10 mg/mL的葡萄糖標準品備用，2-8℃保存2周；

產(chǎn)品說明：
糖化酶，即葡萄糖淀*酶（EC3.2.1.3），又稱γ-淀*酶。糖化酶是由一系列微生物分泌的，具有外切酶活性的胞外酶，主要作用是從淀粉、糊精、糖原等碳鏈上的非還原性末端依次水解α-1,4糖苷鍵，切下一個個葡萄糖單元，對于支鏈淀粉，當遇到分支點時，它也可以水解α-1,6 糖苷鍵由此將支鏈淀粉全部水解成葡萄糖。多應用于酒精、白酒、抗生素、氨基酸、有機酸，甘油，淀粉糖等工業(yè)中，是我國重要的工業(yè)酶制劑之一。
糖化酶將可溶性淀粉生成葡萄糖，堿性條件下，葡萄糖與3,5-二硝基水楊酸共熱后生成紅棕色化合物，在540nm處有最大光吸收，在一定范圍內(nèi)葡萄糖的量與反應液顏色深淺成正比，以此測定糖化酶的活力。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
天平、低溫離心機、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋、研缽/勻漿器/超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測。
細胞：按照細胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），

冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測。

培養(yǎng)液或其它液體：直接檢測。（若有渾濁則離心后進行測定）

二、測定步驟

分光光度計預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至540nm，蒸餾水調(diào)零。
標準品準備：將標準品用蒸餾水稀釋至1.5、1.0、0.8、0.4、0.2、0.1mg/mL。

序號	稀釋前濃度（mg/mL）	標準液體積（µL）	蒸餾水體積（µL）	稀釋后濃度（mg/mL）
1	10	200	800	2.0
2	2.0	150	50	1.5
3	2.0	300	300	1.0
4	1.0	320	80	0.8
5	0.8	200	200	0.4
6	0.4	200	200	0.2
7	0.2	200	200	0.1

實驗中每個標準管需50µL標準溶液。

吸取50μL樣本于1.5mLEP管中沸水浴5min作為對照管的滅活樣本。
加樣表：

試劑（μL）	對照管	測定管	空白管	標準管
滅活樣本	50	-	-	-
樣本	-	50	-	-
蒸餾水	-	-	50	-
標準品	-	-	-	50
試劑一	500	500	500	500
充分混勻，40℃反應20min后沸水浴5min，常溫10000g離心10min。
上清液	500	500	500	500
試劑二	500	500	500	500
混勻，沸水浴5min，流水冷卻后，測定540nm處吸光值A，計算ΔA測=A測定管-A對照管，ΔA標=A標準管-A空白管。標準管和空白管只需做1-2次。

三、糖化酶活性計算
1. 標準曲線的繪制：
根據(jù)標準管的濃度（x，mg/mL）和吸光度ΔA標（y，ΔA標），建立標準曲線。根據(jù)標準曲線，將ΔA測（y，ΔA測）帶入公式計算樣本濃度（x，mg/mL）。
2. 酶活性計算：
（1）按照蛋白濃度計算：
酶活性定義：在40℃每毫克蛋白每小時產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個酶活力單位。
糖化酶活性（U/mg prot）=x×V樣總÷（V樣總×Cpr）÷T=3x÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義：在40℃每克組織每小時產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個酶活力單位。
糖化酶活性（U/g 質(zhì)量）= x×V樣總÷W÷T=3x÷W
（3）按照液體體積計算
酶活性定義：在40℃每毫升液體每小時產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個酶活力單位。
糖化酶活性（U/mL）= x×V樣÷V樣÷T=3x
（4）按照細胞數(shù)量計算
酶活性定義：在40℃每10⁴個細胞每小時產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個酶活力單位。
糖化酶活性（U/10⁴ cell）= x×V樣總÷500÷T=0.006x
V樣：反應體系中加入的樣本體積，50μL=0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL，需自行測定；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應時間，20min=0.333h；500：細胞數(shù)量，500萬。
注意事項：
測定之前進行預實驗，若吸光值較高，請將樣本用提取液進行適當?shù)南♂屧贉y定，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
實驗實例：

取0.1g玉蘭葉片加入1mL提取液冰浴勻漿后于4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上，之后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測=A測定管-A對照管=0.738-0.584=0.154，帶入標準曲線y=0.7372x+0.0175，計算x=0.18516，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

糖化酶活性（U/g 質(zhì)量）=3x÷W=5.55 U/g 質(zhì)量。

取0.1g肝臟加入1mL提取液冰浴勻漿后于4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上，之后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測=A測定管-A對照管=1.420-1.282=0.138，帶入標準曲線y=0.7372x+0.0175，計算x=0.163，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

糖化酶活性（U/g 質(zhì)量）=3x÷W=4.89 U/g 質(zhì)量。

取兔血清按照測定步驟操作，測得計算ΔA測=A測定管-A對照管=1.447-0.753=0.694，帶入標準曲線y=0.7372x+0.0175，計算x=0.918，按照液體體積計算：

糖化酶活性（U/mL）=3x=2.754 U/mL。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC1850/BC1855 可溶性淀粉合成酶（SSS）活性檢測試劑盒
BC1860/BC1865 淀粉分支酶（SBE）活性檢測試劑盒
BC4250/BC4255 淀粉脫分支酶（DBE）活性檢測試劑盒
BC4260/BC4265 直鏈淀粉含量檢測試劑盒