北京索萊寶科技有限公司
專注于生物學(xué)試劑及試劑盒領(lǐng)域
服務(wù)熱線：18101056239
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產(chǎn)品型號：BC3615-100T/48S
更新時(shí)間：2024-07-09
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：1281
010-50973130
產(chǎn)品分類
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堿性木聚糖酶（BAX）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC3615
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 緩沖液 | 液體70 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑一 | 液體8 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 液體12 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
標(biāo)準(zhǔn)品：10mg木糖。臨用前加入667μL蒸餾水配制成100μmol/mL的木糖標(biāo)準(zhǔn)液，2-8℃保存8周。
產(chǎn)品說明：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細(xì)胞壁以及β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進(jìn)有效物質(zhì)的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，因而廣泛的應(yīng)用于釀造和飼料工業(yè)中，堿性木聚糖酶（BAX）一般分離自最適生長pH為9-11的微生物。
BAX在堿性環(huán)境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進(jìn)一步與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng)，在540nm處有特征吸收峰，反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過測定反應(yīng)液在540nm吸光值增加速率，可計(jì)算BAX活力。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低溫離心機(jī)、水浴鍋、研缽/勻漿器、蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1、發(fā)酵液：發(fā)酵液于8000rpm，4℃，離心15min，取上清，置冰上作為待測樣本。
2、組織樣本：稱0.1g組織，加入1mL緩沖液，冰上充分研磨。4℃，8000rpm離心15min，取上清置冰上待測。
3、酶干粉：稱1mg，加1mL緩沖液溶解后置冰上待測。
注：含還原糖較高的樣本（如植物果實(shí)等）可用蒸餾水進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。
二、測定步驟
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至540nm，分光光度計(jì)用蒸餾水調(diào)零。
標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋：臨用前按下表將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋為6、5、4、3、2、1μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液待測。
| 序號 | 稀釋前濃度（μmol/mL） | 標(biāo)準(zhǔn)品體積（μL） | 蒸餾水體積（μL） | 稀釋后濃度（μmol/mL） |
| 1 | 100 | 100 | 900 | 10 |
| 2 | 10 | 120 | 80 | 6 |
| 3 | 10 | 100 | 100 | 5 |
| 4 | 10 | 80 | 120 | 4 |
| 5 | 10 | 60 | 140 | 3 |
| 6 | 10 | 40 | 160 | 2 |
| 7 | 10 | 40 | 360 | 1 |
備注：實(shí)驗(yàn)中每管需要60μL。
樣本測定（在EP管中加入下列試劑）
| 試劑名稱（μL） | 對照管 | 測定管 | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 |
| 樣本 | 60 | 60 | - | - |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 | - | - | - | 60 |
| 蒸餾水 | - | - | 60 | - |
| 緩沖液 | 90 | 90 | 90 | 90 |
| 試劑一 | - | 60 | 60 | 60 |
| 渦旋混勻，置于50℃水浴鍋中反應(yīng)30min，立即沸水浴中10min滅活。(注意不要讓蓋子爆開，以免進(jìn)水，改變了反應(yīng)體系) | ||||
| 試劑一 | 60 | - | - | - |
| 試劑二 | 90 | 90 | 90 | 90 |
| 渦旋混勻，沸水浴中準(zhǔn)確顯色5min(注意不要讓蓋子爆開，以免進(jìn)水改變了反應(yīng)體系)，冷卻至室溫后，吸取200μL于96孔板或微量玻璃比色皿中，盡快測定各管540nm下的吸光度，分別記為A對照、A測定、A空白、A標(biāo)準(zhǔn)。計(jì)算ΔA測定=A測定-A對照，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白?？瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)曲線只需測1-2次。每個(gè)測定管需設(shè)一個(gè)對照管。 | ||||
注意事項(xiàng)：
吸光度變化應(yīng)該控制在0.01~1.2之間，否則加大樣本量或稀釋樣本，注意同步修改計(jì)算公式中的稀釋倍數(shù)。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
取0.1179g橙子加入1mL緩沖液進(jìn)行勻漿研磨，取上清用蒸餾水稀釋10倍后按照測定步驟操作，用96孔板測得ΔA測定=A測定- A對照=1.194-1.040=0.154，帶入標(biāo)曲y=0.2017x-0.1171（R2=0.999），計(jì)算x=1.344，按樣本質(zhì)量計(jì)算BAX活性得：BAX活力（U/g 質(zhì)量）= x÷W2÷30×F =1.344÷0.1179÷30×10=3.80 U/g 質(zhì)量。
取泡菜汁離心取上清按照測定步驟操作，用96孔板測得ΔA測定=A測定- A對照=0.925-0.169=0.756，帶入標(biāo)曲y=0.2017x-0.1171（R2=0.999），計(jì)算x=4.329，按發(fā)酵液計(jì)算BAX活力得：BAX活力（U/mL）= x÷T×F =4.329÷30×1=0.144U/mL。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC2600/BC2605 酸性木聚糖酶（ACX）活性檢測試劑盒
BC2590/BC2595 中性木聚糖酶（NEX）活性檢測試劑盒
BC2620/BC2625 β-木糖苷酶活性檢測試劑盒
堿性木聚糖酶活性檢測試劑盒 糖代謝 堿性木聚糖酶活性檢測試劑盒 糖代謝
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