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產(chǎn)品中心生化檢測試劑盒-常量法土壤系列BC0895-100T/48S土壤過氧化物酶(S-POD)活性檢測試劑盒
產(chǎn)品型號：BC0895-100T/48S
更新時間：2024-07-09
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：1541
010-50973130
產(chǎn)品分類
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土壤過氧化物酶（S-POD）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC0895
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 試劑一 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 液體2 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑三 | 液體5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑四 | 液體50 mL×1瓶（自備） | 2-8℃保存 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
試劑一：臨用前加入5.5 mL蒸餾水，用不完的試劑2-8℃保存一周；
試劑四：自備*；
標(biāo)準(zhǔn)品：相當(dāng)于每1mL*相中含有0.2mg/mL紫色沒食子素。
產(chǎn)品說明：
POD主要來源于土壤微生物，能夠氧化土壤有機(jī)物質(zhì)產(chǎn)生過氧化物，在腐殖質(zhì)的形成過程中具有重要作用。S-POD催化有機(jī)物質(zhì)氧化成醌，后者在430nm有特征光吸收。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、0.5mol/L HCl溶液、微量玻璃比色皿/96孔板（非聚苯乙烯材質(zhì)）、30-50目篩、*（不允許快遞）、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過30-50目篩。
二、測定步驟
標(biāo)準(zhǔn)品處理：將標(biāo)準(zhǔn)品用0.5 mol/L HCl溶液稀釋至0.1、0.08、0.06、0.04、0.02、0.01、0mg/mL，可參考下表。
| 序號 | 稀釋前濃度（mg/mL） | 標(biāo)準(zhǔn)液體積（µL） | 0.5 mol/L HCl體積（µL） | 稀釋后濃度（mg/mL） |
| 1 | 0.2 | 300 | 300 | 0.1 |
| 2 | 0.1 | 400 | 100 | 0.08 |
| 3 | 0.1 | 300 | 200 | 0.06 |
| 4 | 0.1 | 200 | 300 | 0.04 |
| 5 | 0.1 | 100 | 400 | 0.02 |
| 6 | 0.1 | 50 | 450 | 0.01 |
| 7 | - | - | 500 | 0 |
備注：試驗中每個標(biāo)準(zhǔn)管需200µL標(biāo)準(zhǔn)溶液
標(biāo)曲測定：分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至430nm，0mg/mL管調(diào)零，直接測定稀釋后各標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)。
3、樣本測定：
| 試劑名稱 | 測定管 | 對照管 |
| 風(fēng)干土樣（g） | 0.02 | 0.02 |
| 蒸餾水 | - | 20 |
| 試劑一（μL） | 100 | 100 |
| 試劑二（μL） | 20 | - |
| 振蕩混勻，置于30℃水浴鍋準(zhǔn)確反應(yīng)1 h | ||
| 試劑三（μL） | 50 | 50 |
| 試劑四（μL） | 430 | 430 |
| 振蕩數(shù)次，室溫靜置30min，取0.2mL上層液于430nm 處測定吸光值A(chǔ)，記為A測定管、A對照管。計算ΔA測定=A測定管-A對照管。（若使用分光光度計則使用試劑四調(diào)零）。 注：每個測定管需設(shè)一個對照管。 | ||
三、S-POD活力計算
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（y，mg/mL）和吸光度A標(biāo)準(zhǔn)（x，A標(biāo)準(zhǔn)），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA測定（x）帶入公式計算測定中樣本的濃度y值（mg/mL）。
2、S-POD活力計算
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg紫色沒食子素定義為一個酶活力單位。
S-POD活力（U/g 土樣）=y×V提取相÷W÷T=516×y
T：反應(yīng)時間，1h=1/24d；V提取相：提取相總體積，0.43mL；W：樣本質(zhì)量，0.02g。
參考文獻(xiàn)：
Doxey D L. The use of pyrogallol to demonstrate peroxidase in mammalian blood eosinophils[J]. Stain Technology, 1962, 37(6): 367-371.
Nozaki O, Ji X, Kricka L J. New enhancers for the chemiluminescent peroxidase catalysed chemiluminescent oxidation of pyrogallol and purpurogallin[J]. Journal of bioluminescence and chemiluminescence, 1995, 10(3): 151-156.
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0110/BC0115 土壤多酚氧化酶（S-PPO）活性檢測試劑盒
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土壤過氧化物酶(S-POD)活性檢測試劑盒
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