Na⁺ K⁺-ATP酶活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC0065
規(guī)格：100T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑三：臨用前取1支加1 mL蒸餾水溶解，現用現配。用不完的試劑-20℃分裝保存一周。

2. 試劑六：用時加入5 mL蒸餾水，溶解后2-8℃保存兩周。

3. 試劑七：用時加入5 mL蒸餾水，溶解后2-8℃保存兩周。

4. 標準品：10 μmol/mL標準磷貯備液。將標準品20倍稀釋，即取 0.1 mL標準品加1.9 mL蒸餾水充分混勻，配成0.5 μmol/mL標準磷應用液，現用現配。

5. 定磷劑的配制：按H₂O:試劑六:試劑七:試劑八=2:1:1:1（體積比）的比例配制，配好的定磷劑應為淺黃色。若無色則試劑失效，若是藍色則為磷污染，定磷劑根據實驗用量現用現配。

注意：配試劑最好用新的燒杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
產品說明：
Na⁺K⁺- ATP酶廣泛分布于植物、動物、微生物和細胞中，可催化ATP水解生成ADP和無機磷。
Na⁺K⁺-ATP酶分解ATP生成ADP及無機磷，通過測定無機磷的量來確定ATP酶活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、臺式離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
注意事項：
1、由于每一個樣都必須做對照，本試劑盒100管保證測 48份Na⁺K⁺-ATP酶。
2、此法具有微量、靈敏、快速的特點。所以對測定所用試管要求嚴格無磷。
實驗實例：

1. 取0.1g小鼠心臟加入1mL試劑一進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清置冰上，之后用96孔板按照測定步驟操作，測得計算A測定=0.741，A對照=0.509，A標準=0.280，A空白=0.043，按樣本質量計算酶活得：

Na⁺K⁺-ATP酶活力(U/g 質量)=7.5×（A測定-A對照）÷（A標準-A空白）÷W=73.42 U/g質量。

1. 取0.1g稗草加入1mL試劑一進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清置冰上，之后用96孔板按照測定步驟操作，測得計算A測定=0.275，A對照=0.239，A標準=0.280，A空白=0.043，按樣本質量計算酶活得：

Na⁺K⁺-ATP酶活力(U/g質量)=7.5×（A測定-A對照）÷（A標準-A空白）÷W=11.39 U/g質量。

1. 取100μL小鼠血漿檢測，用96孔板測得A測定=1.114，A對照=1.054，A標準=0.280，A空白=0.043，按液體體積計算酶活得：

Na⁺K⁺-ATP酶活力（U/mL）=7.5×（A測定-A對照）÷（A標準-A空白）=1.90 U/mL。
相關發(fā)表文獻：

1. Fangzhou Chen,Ying Zhao,Huizhao Chen,et aL. MicroRNA-98 reduces amyLoid β-protein production and improves oxidative stress and mitochondriaL dysfunction through the Notch signaLing pathway via HEY2 in ALzheimer's disease mice. InternationaL JournaL of MoLecuLar Medicine. October 2018;(IF2.928)

[2] Wanxiu Cao,Jing Li,Yaoxian Chin,et aL. Transcriptomic anaLysis reveaLs effects of fucoxanthin on intestinal gLucose transport. JournaL of FunctionaL Foods. October 2018;(IF3.197)
[3] Li M, Jiang C, Zhang Y, et al. Activities of Amphioxus GH-like protein in osmoregulation: insight into origin of vertebrate GH family[J]. International journal of endocrinology, 2017, 2017.
參考文獻：
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[2] Cornelius F. Modulation of Na, K-ATPase and Na-ATPase activity by phospholipids and cholesterol. I. Steady-state kinetics[J]. Biochemistry, 2001, 40(30): 8842-8851.
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